Author: Alexandre Katalov
Company: Elcom Ltd

ГЛАВА 3
АНТИМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА “ПОЛИСЕПТА” 
И ПОЛИГУАНИДИНОВЫХ БИОЦИДОВ

Антимикробное действие производных гуанидина известно давно. Гуанидиновые антисептики широко используются в мире. Эти соединения значительно эффективнее четвертичных аммониевых соединений, поверхностно-активных веществ (в частности, катамина АБ, роккала, этония и других), производных фенола, хлорактивных дезинфицирующих препаратов. Они стабильны, неагрессивны, не образуют токсичных продуктов, не инактивируются белками, биоразлагаемы.
Биоцидные свойства “Полисепта” и других производных полигексаметиленгуанидина (ПГМГ) обусловлены наличием в его повторяющихся звеньях гуанидиновых группировок, являющихся активным началом некоторых природных и синтетических лекарственных веществ и антибиотиков [1].
Благодаря высокой реакционной способности входящих в их состав гуанидиновых группировок, ассортимент и сфера применения полигуанидиновых дезинфектантов постоянно расширяются.
В научной литературе имеется достаточно сведений об антимикробном действии полимерных производных гуанидина. Представителями этой группы соединений являются дезинфицирующие средства ПОЛИСЕПТ, БИОР, ФОГУЦИД и др., которые применяются в России для дезинфекции поверхностей в помещениях, посуды, предметов ухода за больными и др. объектов при бактериальных инфекциях (включая туберкулез), кандидозах, дерматофитах и для борьбы с плесенью в ЛПУ, детских учреждениях, на коммунальных объектах, предприятиях общественного питания, на предприятиях пищевой промышленности.
По литературным данным [1-15] перечисленные средства обладают бактерицидной активностью при обеззараживании различных объектов в концентрации 0,25-1,0 %, а туберкулоцидным действием - в концентрации 2,0-5,0-10,0 %, т.е. микобактерии по своей устойчивости к воздействию растворов полимерных производных гуанидина значительно устойчивее других видов бактерий. Поэтому, по аналогии, на основании наличия у этих препаратов туберкулоцидного действия, можно с достаточной уверенностью подтвердить данные о наличии у них бактерицидного действия в отношении других видов бактерий.
Перспективность использования полимерных производных гуанидина в качестве бактерицидных препаратов и антисептиков обусловлена тем, что они отвечают требованиям, предъявляемым к современным антисептическим препаратам [18]: хорошо растворимы в воде, растворы бесцветны, не имеют запаха, не вызывают разрушения обрабатываемых материалов, в том числе коррозию металлов; обладают адгезивными и детергентными свойствами; токсические и кумулятивные свойства слабо выражены (III-IV класс опасности).
Полимерная природа препаратов обеспечивает им отсутствие ингаляционной токсичности, а также образование на обработанных поверхностях длительно (более месяца) сохраняющейся полимерной пленки, обеспечивающей пролонгированный биоцидный эффект [9-13, 15].
Исследования биоцидной активности “Полисепта” и других солей полигуанидина, проведенные в ряде специализированных организаций (Институт микробиологии и эпидемиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Покровский завод биопрепаратов, ВНИИ дезинфекции и стерилизации, Московская медицинская академия, МГУ прикладной биотехнологии, Институт трансплантологии и искусственных органов, 5 филиал Института биофизики (г. Ангарск), ВНИИ медицинской реабилитации и физиотерапии), а также в ряде прикладных организаций, показали, что эти препараты весьма активны и обладают широким спектром биоцидного действия [1-15].
Во ВНИИДиС установлено [3], что растворы “Полисепта” в концентрации 0,1-0,05 % в течение 5-25 минут вызывают гибель грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов коринебактерий дифтерии (Corynebacterium diphtheretiae), золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus), а также S. albus и Streptococcus faecalis, брюшнотифозной палочки (Salmonella typhi), шигелл Зонне и Флекснера (Shigella sonnei, S. flexneri), кишечной палочки (Escherichin coli), сальмонеллы (Salmonella typhyminium), вульгарного протея (Proteus vulgaris), синегнойной палочки (Pseudomonas aueruginosa) (табл. 1). Отмечена несколько более выраженная активность в отношении грамположительных микроорганизмов и грамотрицательных бактерий; наиболее устойчивы к действию метацида культуры синегнойной палочки, вульгарного протея, сальмонелл Бреслау и Гертнера, чудесной палочки. Так, золотистый стафилококк погибает в 0,05%-ном растворе ПГМГ-гидрохлорида в течение 5 минут, сальмонеллы - в течение 15-20 минут, протей и синегнойная палочка - 25 минут [1].
Таким образом, представленные в таблице данные свидетельствуют, что “Полисепт” и другие полигуанидиновые дезинфектанты значительно эффективнее хлоргексидина.
Наиболее устойчивыми к действию “Полисепта” оказались микобактерии туберкулеза (штамм 413р) и споры В cereus (штамм 96). Спороцидный эффект был достигнут при подогревании растворов метацида: споры антракоида погибали в 3%-ных растворах метацида при 80 С в течение 60 минут [4]. Для дезинфекции при туберкулезе рекомендованы 4%-ные растворы метацида или фогуцида из расчета 0,5 л/м^2 дважды через 1 час при экспозиции 24 часа [5, 14].

Таблица 1
Минимальная концентрация препаратов, задерживающая рост 
микроорганизмов (бактериостатическая концентрация, мкг/мл) [1]

Тестируемые микроорганизмы | Полисепт | Фогуцид | Глюконат | Хлоргексидин биглюконат
Staphulococcus aureus | 0,6 | 0,3 | 0,6 | 2,0
Pseudjmonas aeruginisae | 9,7 | 6,2 | 9,0 | 25,0
Serratia marcesens | 12,1 | 10,0 | 12,0 | 30,0
Proteus vulgaris | 1,2 | 0,6 | 1,2 | 15,0
Klebsiella pneumoniea | 0,2 | 0,1 | 0,2 | 6,2
Escherichia coli | 0,3 | 0,1 | 0,2 | 10,5
Aspergillus niger | 14,7 | 12.0 | 18,0 | -
Candida geotrichium | 9,8 | 7,2 | 10,2 | 15,0
Penicillium glaucum | 11,0 | 10,1 | 12,0 | -
Salmonella typhimurium | 1,8 | 1,5 | - | 4,0
Pytiosporum | 24,0 | 16,0 | 30,0 | -
Alternaria tennes | 21,0 | 17,0 | 27,1 | -
Coniophora cerebella | 19,3 | 18,0 | 23,1 | -
Poliponis versicolor | 22,2 | 20,0 | 24,0 | -
Trichophyton craterioform | 34,0 | 33,0 | 36.0 | -
Mycosporum lanosum | 16,2 | 14,0 | 19,9 | -
Dermatophyton | 18,0 | 18,0 | 20,0 | -
Trichoderma viride | 18,0 | 18,0 | 23,0 | -
Epiderma rubrum | 20,1 | 18,0 | 24,0 | -
Epidrmaphyton | 15,0 | 10,0 | 18,0 | -
Candida albicans | 10,0 | - | - | 15,0

Антимикробная активность “Полисепта” и “Фогуцида” мало изменяется под влиянием среды. Так, в присутствии белковой нагрузки активность этих препаратов хотя и несколько снижается, однако даже добавление 40 % нормальной лошадиной сыворотки к бактерицидной суспензии приводит к снижению бактерицидности всего в 1,5 раза. Бактерицидное действие препаратов возрастает с увеличением рН раствора: в кислой среде активность несколько снижается; максимальная активность установлена для растворов с рН 10-11. С повышением температуры бактерицидное действие препаратов усиливается: так, при 50 С оно в 3-4 раза выше, чем при 20 С [3, 4].
Изучение бактерицидного действия “Полисепта” в отношении различных штаммов легионелл (Legionella pneumophila), проведенное в Институте микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, показало, что гибель 99 % легионелл I и VII серогрупп наступает после их контакта в течение 1 часа с раствором “Полисепта” с концентрацией 0,5-0,8 мкг/мл; наиболее устойчива по отношению к метациду (1,0 мкг/мл) легионелла VI серогруппы. При увеличении времени экспозиции до 24 часов концентрация “Полисепта” может быть снижена до 0,4-0,6 мкг/мл [6].
По данным Института вирусологии им. Ивановского АМН, “Полисепт” и “Фогуцид” обладают сильным вирулицидным действием по отношению к вирусам герпеса простого, вируса СПИДа, вируса гепатита А, вируса тропической лихорадки; при 15-20 мин экспозиции 2%-ного раствора препарата с вирусосодержащими жидкостями (при комнатной температуре) инфекционный титр вирусов снижается в 1000 и более раз. Некоторые вирусы, однако, устойчивы в присутствии метацида, так, например, ящур [7].
По данным Института биофизики Минздрава РФ (г. Ангарск) и ВНИИДиС [4, 8], бактерицидному действию полигуандиновых препаратов поддаются патогенная микофлора человека и липофильные вирусы (грипп и герпес). В представленной работе исследован широкий спектр грибов: Epidermophiton rubrum, Enidermophiton Kanfmanwolf, Trichophiton crateriforme, Mycrosporum lanosum, Mycrosporum ferrugineum, Aspergillus niger, Candida albicans, Candida geotrichum, Trichoderma virida, возбудители венерических болезней: гонококк Neisseria gonorrhoeae, трихомонас Trichomonas vogin. Из вирусов изучены: Mixovirus, вирусы А и В, вирусы азиатского гриппа и парагриппа типа 3, Koppvirus; Vaccina; Arbovirus; энцефалитный вирус; аденовирусы, различные фаги, например коли-фаги [1, 4].
В МГУ прикладной биотехнологии проведены расширенные исследования по изучению антимикробных и противоплесневых свойств дезинфицирующего средства “ПОЛИСЕПТ-ОП” по отношению к специфической микрофлоре пищевых производств молоко- и мясоперерабатывающих предприятий.
Антибактериальную, противоплесневую и антидрожжевую активность препарата “ПОЛИСЕПТ-ОП” определяли как традиционными микробиологическими методами [11], так и с применением автоматизированного микробиологического анализатора “Биоскрин” (“Лабсистемс”, Финляндия). Этот прибор представляет собой спектрофотометр с вертикальным ходом светового луча, управляемый IBM-совместимым ПК. Возможности “Биоскрина” следующие: разведение исходных растворов, распределение их по кюветам по заданной программе, культивирование микроорганизмов, сопровождающееся термостатированием и периодическим перемешиванием ростовой среды, запоминание экспериментальных данных, математическая обработка результатов, вывод их на дисплей. Одновременно возможна проверка 200 вариантов.
При проведении исследований была использована программа “Биоскрин”, версия 4.1, со следующими изменяемыми параметрами: объем ростовой среды в измерительных ячейках 400 мкл, отсутствие светофильтров, время культивирования; 18 ч - для бактерий, 66 ч - для грибов и дрожжей, температура культивирования соответственно 37 С и 28 С, количество повторов во всех контрольных и опытных вариантах - 3. В качестве тестобъектов взяты культуры бактерий: E. coli PQ 37, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris; штаммы дрожжей: Torulopsis sp., Saccharomyces cerevisae, плесневых грибов: Aspergillus niger, Penicillium chrisogenum. Ростовыми средами служили: “Бактофок-МК” - для бактерий, жидкая среда Чапека - для грибов и дрожжей. Определение ингибирующих концентраций “ПОЛИСЕПТ-ОП” на приборе “Биоскрин” представлено на рис. 1.
Биомасса
| 0,8 | - | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| 0,4 | - | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | | | | 10 | | | | | | | | | 20 | ч,  час

Рис. 1.1. Пример определения ингибирующих концентраций 
“ПОЛИСЕПТА-ОП” для штамма E. coli PQ 37
Обозначения:
1 - кривая роста микроорганизма без добавления дезинфектанта (контроль);
2 - минимальная ингибирующая концентрация препарата;
3 - концентрация, подавляющая рост микроорганизма на 50 %;
4 - концентрация вещества, полностью подавляющая рост микроорганизма.

Результаты проведенных исследований показывают, что дезинфицирующий препарат “ПОЛИСЕПТ-ОП” даже в минимальной концентрации (0,00035 %) полностью подавляет развитие вегетативных клеток нежелательных в мясной промышленности бактерий. Для подавления жизнедеятельности вегетативных клеток плесневых грибов и дрожжей требуются более высокие концентрации препарата (табл. 2).
Таблица 2

Исследованные
микроорганизмы

Минимальная действующая концентрация “ПОЛИСЕПТ-ОП”, %

Концентрация “ПОЛИСЕПТ-ОП”, 
полностью подавляющая рост микроорганизмов, %

E. coli PQ 37 | 0,000020 | 0,00035
Pseudomonas aeruginosa | 0.000020 | 0,00035
Proteus vulgaris | 0,00020 | 0,00030
Torulopsis sp. | 0,00035 | 0,0020
Saccharomyces cerevisiae | 0,00035 | 0,0020
Aspergillus niger | 0,00035 | 0,0020
Penicillium chrysogenum | 0,00035 | 0,0018

Однако в производственных условиях пищевых и других производств наибольшую угрозу представляют споры плесневых грибов и дрожжей. Поэтому была изучена также дезинфицирующая активность препарата “ПОЛИСЕПТ-ОП” по отношению к спорам плесеней и дрожжей. Исследования проводили в соответствии с ГОСТами № 9.049-91 и № 9.050-96 с использованием видов плесневых грибов и дрожжей, выбранных согласно этим ГОСТам. Фунгицидную активность препарата изучали по способности препятствовать росту спор плесневых грибов и дрожжей на твердой питательной среде Сабуро методом “аппликации” или “дисков”.
Споровую суспензию грибов и дрожжей готовили путем смыва водой спор с двухнедельного косяка заданной культуры. Концентрацию спор доводили до 1-2 млн/мл и наносили шпателем на питательную среду Сабуро в чашках Петри. Затем диски фильтровальной бумаги диаметром 25 мм смачивали в 1%-ном растворе препарата “ПОЛИСЕПТ-ОП” и выкладывали на газоны с культурами грибов и дрожжей. Чашки помещали в термостат с t = 28 C, зону подавления развития спор грибов и дрожжей наблюдали через 5 и 7 сут. инкубации.
Приведенные в табл. 3 и на рис. 2 результаты эксперимента показывают, что “ПОЛИСЕПТ-ОП” эффективно подавляет развитие плесневых грибов и дрожжей.
Таблица 3
Исследованные микроорганизмы | Зона подавления, мм
Penicillium chrysogenum | 10,0  1,0
Aspergillus niger | 9,0  1,0
Mucor heterosporum | 8,5  1,0
Toruopsis sp. | 8,0  1,0
Saccharomyces cerevisiae | 7,5  1,0

Рис. 2
Таким образом, анализ литературных данных свидетельствует о высокой бактериологической и фунгистической активности “Полисепта”, “Полисепта-ОП” и других полигуанидиновых биоцидов. Приведенные литературные данные свидетельствуют также, что препараты обладают сильной дезинфицирующей активностью как по отношению к бактериям, так и по отношению к вегетативным и споровым клеткам споровых грибов и дрожжей.
Поэтому дезинфекционные средства на основе ПГМГ-гидрохлорида метацид, полисепт, демос, фогуцид, Биор-1, ПОЛИСЕПТ-ОП широко используются в ряде отраслей народного хозяйства и медицине [9-16].
Вместе с тем микробиологические исследования отечественных и зарубежных ученых, выполненные в последние годы, показывают, что микроорганизмы окружающей среды обладают ярко выраженной селективной способностью и могут формировать свою устойчивость к воздействию различного рода антимикробных веществ, в том числе антибиотиков и дезинфектантов, как по хромосомному, так и по нехромосомному типу [17].
Этот факт требует проведения учеными глубокого анализа существующих дезинфицирующих соединений, подробного изучения механизма их действия, поиска и синтеза новых препаратов с различными механизмами действия, разработки композиционных дезинфицирующих средств путем сочетания двух или нескольких антимикробных соединений с целью снижения адаптационных возможностей микроорганизмов и предупреждения селекции устойчивых штаммов.
В этой связи особую актуальность приобретают работы как по изучению механизмов действия дезинфицирующих веществ, так и по выяснению и изучению возможных механизмов адаптации к ним различных видов микроорганизмов.
Механизм биоцидного действия полигуанидиновых дезинфектантов достаточно хорошо изучен. Он аналогичен действию других высокомолекулярных катионных биоцидов и состоит в следующем. Поскольку микроорганизмы обычно обладают отрицательным суммарным электрическим зарядом, они притягивают к себе N^+ биоцидного препарата, который соприкасается с микроорганизмом, адсорбируется на поверхности клеточной мембраны, вызывает ее разрушение и проникает внутрь клетки. Внутри микробной клетки этот полимерный дезинфектант оказывает блокирующее действие на биологическую активность ферментов, препятствует репликации нуклеиновых кислот, угнетает дыхательную систему клетки. В конечном итоге этот комплекс действия препарата вызывает гибель микроорганизма [18].
В последнее время ряд ученых и специалистов-практиков считают действие антимикробных веществ на клеточные мембраны и мембранные липиды первостепенным и более важным, чем их воздействие на белки и ферменты [19].
Не следует забывать, что липиды выполняют множество разнообразных функций в клетках. Именно в этой связи модификации липидов в составе клеточных мембран, возникающие под действием антимикробных агентов, вызывают повышенный интерес исследователей различного профиля.
В МГУ прикладной биотехнологии проведены подробные исследования действия полигуанидинового дезинфектанта “Полисепт-ОП” на фракционный и жирнокислотный состав мембранных и нейтральных (запасных) липидов на модели эукариотного микроорганизма - плесневого гриба Aspergillus niger, инициирующего биоповрежения как строительных конструкций, производственного оборудования, так и непосредственно продуктов питания [20].
Из представленных на рис. 3 и рис. 4 результатов исследований видно, что в определенных концентрациях (110^-5 %) препарат “Полисепт-ОП” оказывает ростостимулирующее действие на мицелий модельного гриба Asp. niger. Активизация роста изучаемого микроорганизма сопровождается увеличением в клетках гриба уровня общих липидов (рис. 3), содержащих повышенную долю ( на 15 %) мембранных (полярных) липидов (рис. 4).
При замедлении ростовых процессов плесневого гриба A. niger в составе его липидов наблюдается увеличение фракции нейтральных (резервных или запасных) липидов (рис. 4).
Описанные количественные и качественные изменения соотношения липидных фракций в клетках гриба под действием изучаемого дезинфектанта сопровождаются модификациями и в их жирнокислотном составе (см. табл. 4).
В процессе гибели микроорганизма в его мицелии образуются липиды, содержащие большее количество насыщенных жирных кислот с более низкими значениями иодного числа и коэффициента ненасыщенности (см. табл. 4).
В жирнокислотном составе нейтральных липидов под влиянием препарата “Полисепт-ОП” наблюдаются аналогичные изменения, однако во всех вариантах опыта эта липидная фракция остается более насыщенной, о чем свидетельствуют представленные в таблице результаты проведенного эксперимента.
Таким образом, проведенные исследования показывают, что полигуанидиновые дезинфектанты - мембраноактивные соединения, оказывающие активное воздействие на фракционный и жирнокислотный состав мембранных липидов плесневых грибов. Установленные модификации в составе липидов грибов под действием препарата “Полисепт-ОП” могут найти применение в биотехнологических разработках для получения липидов заданного состава.
Подробное изучение липидов плесневого гриба A. niger позволяет сделать заключение, что у этого микромицета, так же как и у другого мицелиального гриба Cunninghamella japonica, в ответ на стрессовое воздействие (в данном случае  на  воздействие  дезинфектанта)  начинают  функционировать

Рис. 3. Влияние “Полисепта-ОП” на рост и липидообразование у A. niger

Рис. 4. Влияние “Полисепта-ОП” на фракционный состав липидов A. niger 
(ПЛ - полярные липиды, НЛ - нейтральные липиды)

Таблица 4

Показатели 
жирнокислотного

Контрольная проба без добавления

Опытная проба 
с добавлением “Полисепта-ОП”

состава липидов | “Полисепта-ОП” | 0,00001 % | 0,00002 %
Полярные липиды
Жирные кислоты, % от суммы | | |
С_11:0 | 0,30 | - | 0,41
С_13:0 | 0,11 | 0,91 | 1,23
С_14:0 | 0,57 | 1,94 | 0,93
С_14:1 | 0,11 | 0,89 | 0,26
С_15:0 | 0,45 | 0,78 | 0,92
С_16:0 | 16,09 | 17,77 | 18,94
С_16:1 | 5,44 | 7,97 | 8,09
С_17:0 | 1,89 | 1,30 | 1,85
С_17:0 | 1,51 | 1,30 | 1,80
С_18:0 | 4,99 | 6,64 | 7,78
С_18:1 | 30,75 | 27,90 | 29,67
С_18:2 | 27,39 | 29,92 | 21,54
С_20:0 | 10,40 | 2,78 | 6,58
Иодное число | 78,75 | 82,87 | 70,15
Коэффициент ненасыщенности | 0,9259 | 0,9770 | 0,8290
_насыщ. / _ненасыщ. жирных кислот | 0,53 | 0,47 | 0,63
Нейтральные липиды
Иодное число | 69,96 | 72,82 | 61,32

Коэффициент 
ненасыщенности

0,8215

0,8588

0,7356

_насыщ. / _ненасыщ. жирных кислот | 0,70 | 0,63 | 0,90

такие механизмы биохимической адаптации, как изменение ненасыщенности жирных кислот мембранных липидов, изменение длины их ацильных цепей, модификации во фракционном составе клеточных липидов [21].
Полученные данные чрезвычайно важны не только для познания биохимических механизмов адаптации микроорганизмов к действию химических веществ, но и для дальнейшего выбора и применения вновь синтезированных дезинфектантов. Результаты проведенных исследований представляют также интерес как для выяснения последующего воздействия дезинфицирующих веществ на экологию, так и для создания и применения новых композиционных антимикробных препаратов.
В результате проведенной работы установлена также четкая зависимость эффективности действия дезинфектанта от его применяемой дозы. Анализ работы свидетельствует, что изучаемый препарат “Полисепт-ОП” обладает высокой эффективностью в подавлении развития вегетативных клеток плесневых грибов.
Таким образом, есть все основания утверждать, что полигуанидиновые дезинфектанты являются не только экологически чистыми, безопасными для людей и животных, но и обладают высокой эффективностью в подавлении жизнедеятельности микроорганизмов.

ЛИТЕРАТУРА К ГЛАВЕ 3

1. Гембицкий П.А., Воинцева И.И. Поимерный биоцидный препарат полигексаметиленгуанидина. - Запорожье: Полиграф, 1998. - 44 с.
2. Dene G // Water and waste Trem 1992, 35 № 11. Р. 56.
3. Скворцова К.Е., Нехорошева А.Г., Гембицкий П.А. // Проблемы дезинфекции и стерилизации: Сб. - Вып. 23. - М.: ВНИИДиС, 1974. - С. 58.	4. Скворцова К.Е., Нехорошева А.Г., Гембицкий П.А. // Проблемы дезинфекции и стерилизации: Сб. - Вып. 24. - М.: ВНИИДиС, 1975. - С. 58.
5. Временное наставление по применению МЕТАЦИДА, ПОЛИСЕПТА и ФОГУЦИДА для ветеринарной дезинфекции. № 22-157 от 26.12.1991 г.
6. Отчет Института микробиологии и эпидемиологии им. Н.Ф.Гамалеи. - М., 1998.
7. Боренко Е.И., Гудкова Е.И., Павлова Н.И. и др. э/с. // Медицина. - 1997. - № 4. - С. 41.
8. Отчет Института биофизики Минздрава РФ за 1994 г.
9. Кузнецова Л.С., Снежко А.Г., Борисова З.С., Розанцев Э.Г. // Молочная промышленность. - 1997. - № 6. - С. 30.	
10. Снежко А.Г., Кузнецова Л.С., Борисова З.С., Розанцев Э.Г., Танирбергенов Г.Б. // Пищевая промышленность. - 1998. - № 2. - С. 67.
11. Снежко А.Г., Кузнецова Л.С., Борисова З.С., Гембицкий П.А. и др. // Мясная индустрия. - 1998. - № 6. - С. 44.
12. Кузнецова Л.С., Снежко А.Г., Борисова З.С., Гембицкий П.А. и др. // Мясная индустрия. - 1998. - № 7. - С. 20.
13. Снежко А.Г., Кузнецова Л.С., Федотова А.В. и др. Сыроделие. - 1998. - № 2-3. - С. 4.
14. Федорова Л.С. Изучение возможности применения полимерных производных гуанидина для дезинфекции при туберкулезе // Перспективные биоцидные материалы и технологии с использованием полигексаметиленгуанидина: Сб. - М.: Ин-т эколого-технологических проблем, 2000. - С. 67.
15. Снежко А.Г., Кузнецова Л.С., Борисова З.С. Применение полигуанидиновых антисептиков в пищевой промышленности // Перспективные биоцидные материалы и технологии с использованием полигексаметиленгуанидина: Сб. - М.: Ин-т эколого-технологических проблем, 2000. - С. 56.
16. Кузнецова Л.С., Снежко А.Г., Борисова З.С., Караваева О.И. Технология применения нового дезинфицирующего препарата “Полисепт-ОП” // Мясная индустрия. - 1998. - № 8. - С. 39-41.
17. Дезинфектанты. Новые аспекты исследований // Провизор. - 1999. - № 6.
18. Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф. Антимикробные полимеры. - СПб.: Гиппократ, 1993. - 264 с.
19. Кузнецова Л.С. Перспективность использования пищевого консерванта в колбасном производстве // Мясная индустрия. - 2001. - № 2.
20. Кузнецова Л.С. О механизме действия полигуанидиновых дезинфектантов // Мясная индустрия. - 2001. - № 4. - С.
21. Кузнецова Л.С. Влияние антиоксидантов на состав липидов Cunninghamella japonica в норме и в состоянии стресса: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - М., 1990.